Yakon Dan Penelitian Tentang Anti diabetes
Yakon Dan Penelitian
Tikus berumur enam minggu yang dipilih untuk penelitian ini, karena mereka menampilkan resistensi insulin jelas pada usia ini. Tikus ditempatkan secara individual di bawah dikontrol terang / gelap (12/12 h) dan kondisi suhu, dan memiliki akses bebas ke air dan chow. Tikus diberi makan diet chow yang normal isocaloric mengandung dari 6,5% aroid (kontrol) atau 6,5% yacon selama 5 minggu. Tikus menerima diet segar setiap 3 hari, dan tingkat konsumsi makanan dan keuntungan berat badan dipantau setiap 3 hari. Semua prosedur dilakukan sesuai dengan Panduan untuk Perawatan dan Penggunaan Laboratorium Hewan dari NIH dan telah disetujui oleh Subyek Hewan Komite Fukushima Medical University, Jepang.
Prosedur clamp euglycemic-hyperinsulinemic
Tikus ditanamkan dengan tiga kateter (Micro-Renathane MRE-033, 0,033 cm OD dan 0.014 cm di ID; Braintree Ilmiah) setelah makan chow ditunjukkan selama 4 minggu. Dua kateter ditempatkan ke dalam vena jugularis kanan, dan satu lagi ditempatkan ke dalam arteri karotis kiri bawah dosis tunggal anestesi yang pentobarbital 50 mg kg -1 (Dainippon Sumitomo Pharma) diberikan intraperitoneal. Kateter yang terowongan subkutan, exteriorized di belakang leher dan penuh dengan garam heparinized. Kateter jugularis dan karotis digunakan untuk infus dan pengambilan sampel darah, masing-masing.
Pada hari 7 setelah operasi, sensitivitas insulin dinilai dengan menggunakan penjepit euglycemic-hyperinsulinemic. Tikus dipuasakan selama 12 h sebelum memulai semua percobaan.Percobaan clamp euglycemic-hyperinsulinemic mulai dengan injeksi priming (2,5 μCi per 0,5 ml) dan infus konstan (0.04 μCi per menit) dari D- [3- 3 H] glukosa (PerkinElmer Inc). Setelah 120 min pelacak equilibrium dan pengambilan sampel basal pada waktu -10 min, dan 0 min, glukosa (50% dekstrosa, infus variabel; Otsuka Pharmaceutical Co) dan pelacak (0,12 μCi min-1) ditambah insulin (25 mU kg min -1, Novolin R; Novo Nordisk) yang dimasukkan ke dalam vena jugularis seperti yang dijelaskan sebelumnya.
Sampel darah kecil (60 ml) ditarik pada 10-menit interval dan segera dianalisis untuk glukosa (Compact Elektroda Gula Darah Analyzer Antsense: Horiba Ltd, Kyoto, Jepang) untuk menjaga integritas dari klem glukosa sepanjang durasi percobaan. Sampel darah diambil pada -120 min (awal percobaan), -10 min dan 0 min (basal), dan 110 min dan 120 min (akhir percobaan), untuk penentuan aktivitas spesifik-glukosa, dan konten insulin. Untuk memastikan akurasi, basal dan pengambilan sampel terminal dilakukan dua kali, pada interval 10-menit. Kami mengkonfirmasi bahwa kondisi steady state dicapai pada akhir klem sebelum memperoleh spesimen darah terminal dengan mengukur glukosa darah setiap 10 min dan meyakinkan bahwa keadaan stabil untuk infus dan glukosa plasma kadar glukosa dipertahankan selama minimal 20 menit sebelum pengambilan sampel akhir. Kami mendefinisikan konsentrasi glukosa darah mapan sebagai salah satu di mana konsentrasi glukosa dan tingkat infus berfluktuasi oleh 3 mg dl -1 atau kurang dan sebesar 5% atau kurang, masing-masing, lebih dari 10 min. Semua sampel darah segera disentrifugasi, dan plasma disimpan pada -80 ° C untuk analisis selanjutnya. Setelah pengambilan sampel darah terminal 120 min, hewan segera eutanasia dengan pentobarbital (180 mg kg -1). Jaringan diambil dan segera dibekukan dalam nitrogen cair dan disimpan pada -80 ° C untuk analisis metabolik berikutnya.
